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DSZ2000倒置显微镜这样操作好了,用起来事倍功半
发布时间:2021-08-25 点击量:22
   谈谈关于DSZ2000倒置显微镜的哪些事,也好明白为什么别人的图片那么清楚,你的就不行哩?
  DSZ2000倒置显微镜的结构特点:
  DSZ2000倒置显微镜的主要组成部分和正置显微镜一样,在结构上物镜在样品下方,而聚光镜在样品上方。这种特点使得DSZ2000倒置显微镜的聚光镜和物镜之间可以拥有更长的工作距离,这样载物台上就可以放置比较大型的培养容器,包括培养板、培养皿、培养瓶甚至细胞滚瓶和细胞工厂进行细胞形态的观察。
  倒置显微主要用来观察活细胞,可活细胞无色透明,又不比染色的玻片,如何观察呢?
  一般的活体培养细胞虽没有染色,但是细胞中有各种亚细胞结构,质膜及细胞器分布在细胞的不同位置,那么光穿过细胞不同位置时光程就会有差异,相差显微技术正是将这种不可见的光程差转变为肉眼可见的振幅差(明暗差异)。
  在相差显微镜的光路中,有两个重要部件,分别是位于物镜的后焦平面的相位板和位于聚光镜前焦平面的环形孔,一般来说,不同的物镜对应不同的相位板,因此在转换物镜时,聚光镜上面的环形孔板也需要对应转换:
  --- 相差物镜中间有相位板,那倒置相差显微镜就不能看玻片了?非也,相差物镜也兼容明场观察方式,所以用倒置也一样可以观察染色切片,只是同正置镜相比,因光路略长,观察玻片的话效果没有正置镜那么那么好。现在是不是知道了为什么很多科研工作者愿意购买倒置型的共聚焦系统而不选择正置的了吧,功能多啊!
  那怎样在现有的DSZ2000倒置显微镜平台上,把玻片和培养瓶都拍出高逼格的水准哩?
  我们先来讲讲一颗标准物镜携带的重要标志:
  除了放大倍数和数值孔径,以下几个参数也很重要哦:
  工作距离:指样品调准焦点时的物镜前端透镜与试样表面(或使用盖玻片时,与盖玻片顶面)的距离。
  盖玻片厚度校正:盖玻片是制样中常用的耗材,但是盖玻片是有厚度的,它会对光线穿行造成一定的改变,从而影响成像的清晰度和亮度。在DSZ2000倒置显微镜上,为了更方便地观察到皿、板等不同类型的耗材,常常配置长工作距离物镜,在一些长工作距离物镜上,我们会发现有一圈能左右转动的校正环。校正环的调节能帮助我们更清晰地观察到不同厚度的培养载体上的细胞样本。
  聚光镜上的环形板:对于相差物镜,不同倍数的物镜内置了不同的相位板,需要与插入聚光镜中的相差滑块上的环形板一一对应,这样才能在不同倍数下得到反差明显的相差图像。
  围绕最基础的这三点,再来说说如何获取一副高品质的图像吧:
  确保待观察的细胞,无论培养载体是玻片、腔室盖玻片还是板、滚瓶,都要在物镜工作距离之内,如果要观察的样品距离物镜很远,超出其工作距离,是如何都无法对焦清晰的;
  在进行不同倍率物镜的切换时,要对应聚光镜上相差滑块中的环形板,必要时还可以对聚光镜的孔径光阑做调节以得到反差更合适的图像。
  如果在进行某个倍率物镜的观察时,样品既有细胞爬片,又有培养皿,还有带盖片的切片,在对不同标本进行观察时,需要调整物镜上的盖玻片校正环,将刻度调整为当前物镜与样品之间那层培养容器的厚度。
  想拍一副好的图片怎么听起来这么复杂,如果我只是要看看细胞状态,留个图做记录,有没有简单的方法呢?
  对于只用来观察细胞生长状态的基础款DSZ2000倒置显微镜来说,这样转换物镜与移动相差滑块无疑增加了重复性的工作量,奥林巴斯新型倒置相差显微镜CKX53可以配置IPC预对中系列物镜,这样在进行不同倍率的切换观察时,无需再移动相差滑块,所有的物镜对应一个环形板。瞬间感觉轻松了有没有?!
 

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